J. Wong Sak Hoi, C. Herbert, M.-T. Esquerré-Tugayé et B. Dumas
UMR CNRS-UPS 5546 Surfaces Cellulaires et Signalisation chez les Végétaux, Pôle de Biotechnologie Végétale, 24 chemin de Borde Rouge BP 17 Auzeville 31326 Castanet-Tolosan

Au cours de l'interaction avec la plante hôte, Colletotrichum lindemuthianum, l'agent de l'anthracnose du haricot, sécrète des pectinases impliquées dans la dégradation de la paroi végétale. Parmi les gènes codant ces enzymes, nous nous sommes plus particulièrement intéressés à CLPG2, codant une endopolyglacturonase pariétale, exprimée dans les stades précoces de l'infection. Une recherche des éléments régulateurs présents dans la séquence promotrice de CLPG2 a été réalisée en fusionnant différentes versions délétées du promoteur au gène rapporteur codant la GFP (Green Fluorescent Protein). Cette analyse a conduit à l'identification de séquences agissant en "cis" indispensables pour l'expression de CLPG2 au cours de la formation de l'appressorium aussi bien sur lame de verre que lors du contact avec la plante. En combinant l'utilisation du gène rapporteur et des expériences de retard sur gel d'électrophorèse, la séquence précise de ces boites régulatrices à été identifiée. Il s'agit de l'assemblage en tandem de 2 types de séquences présentant une forte homologie avec les boites permettant la régulation des gènes impliqués dans la croissance invasive chez la levure Saccharomyces cerevisiae (Herbert et al. J. Biol. Chem. 2002, 277, 29125-29131). Chez la levure, deux facteurs de transcription, appelés STE12 et TEC1 sont capables de se lier à ces séquences. STE12 est activé par la MAPkinase KSS1 suite à la perception de signaux environnementaux déclenchant la croissance invasive, caractérisée par le développement pseudo-hyphal. Ces résultats nous ont conduit à rechercher un orthologue de STE12 chez C. lindemuthianum. Un gène appelé CLSTE12 a été obtenu et caractérisé. La protéine codée par ce gène comprend un homéodomaine fortement homologue à l'homéodomaine de STE12 de levure et deux doigts de zinc que l'on retrouve uniquement chez les protéines de type STE12 de champignons filamenteux. Pour évaluer le rôle de CLSTE12, le gène correspondant a été disrupté chez C. lindemuthianum. Deux mutants ont été obtenus et caractérisé. Ces deux souches présentent un développement saprophytique identique à la souche sauvage. Par contre, une forte réduction du pouvoir pathogène a été observé. Ce résultat montre que CLSTE12 joue un rôle esentiel dans le pouvoir pathogène de C. lindemuthianum en contrôlant l'expression de gènes comme les pectinases dans les tout premiers stades de l'infection.